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ND2000超微量分光光度計(jì)的操作指南通常包括以下步驟

更新時(shí)間:2025-04-08瀏覽:251次

  ND2000超微量分光光度計(jì)是一種專為微量樣本設(shè)計(jì)的分光光度計(jì),可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A=εcl),通過測量特定波長(如DNA 260 nm、蛋白質(zhì)280 nm)的光吸收值,計(jì)算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。光源通常采用氘燈,它能發(fā)出連續(xù)的紫外光譜。單色器(如光柵或棱鏡)用于從光源發(fā)出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內(nèi)放置了微量樣品池,其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間,以適應(yīng)微量樣品的測量需求。檢測器則負(fù)責(zé)捕捉經(jīng)過樣品吸收后的光線強(qiáng)度,最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析和計(jì)算。
  ND2000超微量分光光度計(jì)的操作指南通常包括以下步驟:
  1、儀器準(zhǔn)備
  接通電源與預(yù)熱:將超微量分光光度計(jì)的電源線插好,打開電源開關(guān),等待儀器軟件初始化。不同型號的儀器預(yù)熱時(shí)間可能有所不同,一般需要預(yù)熱15分鐘至30分鐘,使其溫度穩(wěn)定,確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
  清潔樣品池:檢查樣品池是否干凈,如有污染或殘留液體,需用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ?0%乙醇)輕輕擦拭干凈,并用無塵紙擦干。注意避免刮傷樣品池表面。
  儀器校準(zhǔn):使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行儀器校準(zhǔn),校準(zhǔn)操作根據(jù)儀器型號可能有所差異,請參考儀器說明書。這一步是為了確保測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
  2、設(shè)置測量參數(shù)
  選擇測量波長:根據(jù)待測物質(zhì)的特性和實(shí)驗(yàn)要求,選擇合適的測量波長。不同的物質(zhì)在特定波長下有最大吸收峰,選擇該波長可以獲得最佳的測量靈敏度和準(zhǔn)確性。例如,對于DNA的測量,通常選擇260nm和280nm的波長。
  確定光程長度:光程長度是指光線通過樣品的距離,一般為1cm。但部分超微量分光光度計(jì)的光程較短,如0.5mm、1mm等,具體需根據(jù)儀器型號和樣品特性來確定。
  設(shè)定測量模式:常見的測量模式有吸光度模式、濃度模式、透過率模式等。吸光度模式用于直接測量樣品的吸光度值;濃度模式可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算樣品的濃度;透過率模式則用于測量樣品的透光率。用戶需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠非闆r選擇合適的測量模式。
  3、樣品測量
  空白對照調(diào)零:在進(jìn)行樣品測量之前,通常需要進(jìn)行空白對照調(diào)零,以消除溶劑、比色皿等因素對測量結(jié)果的影響。取適量的空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液等),加到檢測基座上,放下樣品臂,浸泡一段時(shí)間(如2-3分鐘),然后用無塵紙將檢測基座擦拭干凈。之后點(diǎn)擊調(diào)零按鈕,使儀器以空白溶劑為空白對照進(jìn)行調(diào)零。
  加入樣品:將待測樣品用移液器吸取適量,加到檢測基座上。注意加樣時(shí)要緩慢、準(zhǔn)確,避免產(chǎn)生氣泡或溢出。對于一些需要稀釋的樣品,應(yīng)先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屘幚?,使其濃度在儀器的線性范圍內(nèi)。
  開始測量:放下樣品臂,使樣品與檢測基座充分接觸。然后點(diǎn)擊測量按鈕,儀器將自動(dòng)記錄并顯示樣品的吸光度值、濃度或其他相關(guān)參數(shù)。測量完成后,屏幕會(huì)顯示測量結(jié)果,包括吸光度、濃度、A260/A280比值等信息。
  4、數(shù)據(jù)處理與記錄
  查看結(jié)果:測量完成后,仔細(xì)查看儀器顯示的測量結(jié)果,確認(rèn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。如果需要進(jìn)行多次測量,可以記錄每次的測量結(jié)果,并計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
  保存數(shù)據(jù):將測量結(jié)果保存到計(jì)算機(jī)或打印機(jī)中,以便后續(xù)分析和處理??梢允褂脙x器自帶的軟件或第三方軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

 

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