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蛋白純化注意事項

更新時間:2021-06-16瀏覽:1763次

1.  選擇表達載體時,要根據(jù)所表達蛋白的最終應(yīng)用考慮。如為方便純化,可選擇融合表達;如為獲得天然蛋白,可選擇非融合表達。
 
2.  融合表達時在選擇外源DNA同載體分子連接反應(yīng)時,對轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾。

3.  菌液OD值要小于1,否則細胞太濃太老,不易破碎,且質(zhì)粒易丟失。

4.  誘導時間最好做一個梯度,不同蛋白誘導時間需摸索。

5.  誘導溫度適當摸索:25、30℃。

6.  IPTG濃度:一般在1 mM 以內(nèi),可適當摸索。

7.  超聲條件可視實際情況改變,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。

 

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